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SS-mPEG chemical modification of recombinant phospholipase C for enhanced thermal stability and catalytic efficiency
摘要
聚乙二醇化是一种最有前途和广泛研究的策略，用于改善蛋白质的性质以及酶的物理和热稳定性。磷脂酶C是一种水解磷脂的酶，在许多领域有着广泛的应用。但其热稳定性差，生产成本高，制约了其工业应用。本文研究了用甲氧基聚乙二醇琥珀酰琥珀酸酯(SS-mPEG, MW 5000)对重组PLC进行化学改性，以提高其稳定性。将蜡样芽孢杆菌HSL3分离株的PLC基因与新型泛素相关小修饰物SUMO融合，在大肠杆菌中过表达。SUMO-PLC的可溶性部分达到重组蛋白总含量的80%。该酶在80°C时表现出最大的催化活性，在40-70°C时具有相对的热稳定性。它对磷脂酰胆碱具有广泛的底物特异性和显著的活性，是一种典型的工业用非特异性PLC。SS-mPEG-PLC配合物在70-80℃表现出较好的热稳定性，催化效率(Kcat/Km)比游离PLC提高了3.03倍。CD谱分析表明，化学修饰后SS-mPEG-PLC可能存在酶聚集，这是SS-mPEG-PLC具有较高热稳定性的原因。二级结构中反平行β片的增加也使其比平行β片更稳定。SS-mPEG链在酶分子表面的存在一定程度上改变了底物的结合速率，从而显著提高了催化效率。该研究为添加SS-mPEG以增强磷脂酶C在高温下的工业应用提供了见解。
以上研究使用赛诺邦格的产品：
产品名称：mPEG-SS
产品简称：甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯（酯键）
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